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鸭梨多酚氧化酶基因CDS区的克隆及表达

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【作者】 李桂琴李会宣许冬倩刘坤张玉星

【Author】 LI Gui-qin1,2, LI Hui-xuan1, XU Dong-qian1, LIU Kun1, ZHANG Yu-xing2 (1College of Biological Science and Engineering, Hebei University of Economics and Business, Shijiazhuang, Hebei 050061 China; 2Horticultural College, Hebei Agricultural University, Baoding, Hebei 071001 China)

【机构】 河北经贸大学生物科学与工程学院河北农业大学园艺学院

【摘要】 以鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果皮基因组DNA为模板,根据已经发表的多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)基因保守序列设计引物,利用PCR技术,克隆得到鸭梨多酚氧化酶编码区序列,将此核酸序列克隆到载体pGEM-T,酶切鉴定后测序,结果表明该段序列含有1782个核苷酸,编码593个氨基酸。对鸭梨多酚氧化酶基因片段的一致性分析和进化树分析表明,该片段与沙梨(Pyrus pyrifolia,AB056680)、苹果(Malus domestica,L29450)、李(Prunuss alicina,AY866432)以及杏(Prunus armeniaca,AF020786)的一致性分别为99%、96.3%、82%和51.4%,绘制的进化树和形态学分类地位相一致。将该片段连接到表达载体pET39b上,获得的重组子命名为pET39b-PPO,热激法转化表达受体大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG进行诱导。SDS-PAGE分析表明,PPO基因在大肠杆菌中被诱导表达蛋白质相对分子质量约66ku,检测表明具有多酚氧化酶的活性。

【关键词】 鸭梨多酚氧化酶基因克隆表达
【基金】 河北省科技攻关项目(042401116D-2)
【所属期刊栏目】 研究简报 (2008年04期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2008.04.017
  • 【分类号】S661.2
  • 【被引频次】20
  • 【下载频次】282
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