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正交设计优化果梅ISSR反应体系

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【作者】 桂腾琴孙敏乔爱民王心燕

【Author】 GUI Teng-qin1,2,3,SUN Min2,3*,QIAO Ai-min4,WANG Xin-yan4 (1Deptment of Chemistry & Life Science, Qianxinan Teachers’College, Xingyi, Guizhou 562400 China; 2College of Life Science, South- west University, Chongqing 400715 China; 3Key Laboratory of Eco-environments (Ministry of Education) in Three Gorges Reservoir Region of Chongqing 400715 China; 4College of Agriculture and Landscape Architecture, Zhongkai University of Agriculture and Technology, Guangzhou, Guangdong 510225 China)

【机构】 黔西南民族师范高等专科学校化学生物系西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室仲恺农业技术学院农业与园林学院

【摘要】 以果梅(PrunusmumeSieb.etZucc.)品种鸳鸯梅为试材,采用改良的CTAB法提取果梅嫩叶DNA,利用正交设计L16(45)探讨Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量对果梅ISSR-PCR反应的影响,正交试验的结果采用直观分析和方差分析相结合。建立了果梅的ISSR-PCR优化反应体系,在20μL反应体系中含2μL10×Buffer,2.5mmol·L-1Mg2+,0.2mmol·L-1dNTPs,0.32μmol·L-1引物,20~80ng模板DNA,0.75UTaqDNA聚合酶。在此基础上探讨了引物UBC840的最适退火温度、最佳循环次数及延伸时间,引物UBC840的最适退火温度为50.6℃。应用该优化反应体系,用2个不同引物对19份果梅资源DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化的反应体系具有较高的稳定性。

【基金】 广东省科技计划项目(2007A020300002-6)
【所属期刊栏目】 技术与方法 (2009年01期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2009.01.023
  • 【分类号】S662.4
  • 【被引频次】67
  • 【下载频次】662
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