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根癌农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立

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【作者】 杨越张志宏刘月学何平周宇代红艳赵桂玲

【Author】 YANG Yue,ZHANG Zhi-hong,LIU Yue-xue,HE Ping,ZHOU Yu,DAI Hong-yan,ZHAO Gui-ling(College of Horticulture,Shenyang Agricultural University,Shenyang,Liaoning 110866 China)

【机构】 沈阳农业大学园艺学院

【摘要】 以寒富苹果组培苗叶片为外植体,利用植物表达载体上含潮霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBI-A1301)和含卡那霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBIA2301)对影响寒富遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,寒富叶片对潮霉素反应敏感,在附加潮霉素的培养基上寒富叶片褐化较为严重。潮霉素和卡那霉素适宜的筛选质量浓度分别为4 mg.L-1和25 mg.L-1。农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立以MS+TDZ 2.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1培养基为叶片离体再生芽培养基。适宜的转化条件为:菌液浓度D 600nm=0.5、叶片外植体在菌液浸泡8 min、共培养时间为3~4 d、推迟4 d进行筛选培养。抗性基因对转化效率具有明显的影响,EHA105(pCAMBIA2301)的平均抗性芽再生率(0.96%)比EHA105(pCAMBIA1301)的平均抗性芽再生率(0.58%)高出几乎50%,EHA105(pCAMBIA2301)的抗性芽再生率最高达1.87%。GUS组织化学染色和PCR鉴定结果表明本研究获得了寒富苹果转基因植株。

【关键词】 苹果寒富农杆菌抗性基因遗传转化
【基金】 辽宁省高等学校创新团队项目(2009T089)
【所属期刊栏目】 研究论文 (2010年02期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2010.02.006
  • 【分类号】S661.1
  • 【被引频次】29
  • 【下载频次】508
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