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苹果茎沟病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清的制备

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【作者】 宋艳苏郑银英李丽娜王国平洪霓

【Author】 SONG Yan-su1,ZHENG Yin-ying2,LI Li-na1,WANG Guo-ping1,HONG Ni1(1Hubei Crop Disease Monitoring and Safety Control Key Laboratory,College of Plant Science and Technology,Huazhong Agricultural Uni-versity,Wuhan,Hubei 430070 China;2Key Laboratory of Agriculture and Biotechnology,College of Life Sciences,Shihezi University,Shihezi,Xinjiang 832003 China)

【机构】 华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室

【摘要】 构建了来源于梨的苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)分离物P-4-1-69和P-L2的原核表达载体pET-P-4-1-69和pET-P-L2,转化大肠杆菌BL21(DE3),在1 mmol.L-1 IPTG下诱导表达。SDS-PAGE和用商业化ASGV抗体对诱导表达产物进行Western Blot分析结果表明,2个分离物的外壳蛋白基因(cp基因)在大肠杆菌中成功地进行了高效表达,重组外壳蛋白的大小约为31 ku。分别用含分离物P-4-1-69和P-L2的重组外壳蛋白的胶条免疫大耳白兔,制备了抗ASGV重组外壳蛋白的抗血清。采用间接ELISA法用所制备的抗血清对回收的重组外壳蛋白进行检测,当抗分离物P-4-1-69和P-L2的重组外壳蛋白的抗血清分别稀释512 000倍和64 000倍时,检测结果仍为阳性。Western Blot分析和组织免疫印迹检测(Tissue blotting immunoassay,TBIA)结果表明,纯化的抗体具有较强的特异性,可有效检测梨样品中的ASGV。

【关键词】 苹果茎沟病毒cp基因原核表达抗血清
【基金】 国家梨产业技术体系(nycytx-29-08)
【所属期刊栏目】 研究论文 (2010年05期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2010.05.018
  • 【分类号】S436.61
  • 【被引频次】9
  • 【下载频次】185
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