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根癌农杆菌介导的‘魏可’葡萄遗传转化体系的优化

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【作者】 余智莹张平徐志胜孙兴民章镇陶建敏

【Author】 YU Zhi-ying,ZHANG Ping,XU Zhi-sheng,SUN Xing-min,ZHANG Zhen,TAO Jian-min*(College of Horticulture,Nanjing Agricultural University,Nanjing,Jiangsu 210095 China)

【机构】 南京农业大学园艺学院

【摘要】 以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min,共培养3 d,卡那霉素质量浓度5 mg·L-1,羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1。采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化,共获得9株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测,结果表明,有4株通过了PCR检测,1株通过了RT-PCR检测,初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中。将PCR产物回收,经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定,发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强。

【基金】 国家葡萄产业技术体系(CARS-30);江苏省科技厅(BE2009314-2);江苏省农业科技自主创新资金CX(10)110
【所属期刊栏目】 研究论文 (2012年03期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2012.03.024
  • 【分类号】S663.1
  • 【被引频次】7
  • 【下载频次】194
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