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葡萄抗病毒双价RNAi植物表达载体构建及其对烟草的遗传转化

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【作者】 田莉莉牛良

【Author】 TIAN Li-li,NIU Liang(Key Laboratory of Fruit Breeding Technology,Ministry of Agriculture of China,Henan Provincial Key Laboratory of Fruit and Cucurbit Biology,Zhengzhou Fruit Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou,Henan 450009 China)

【机构】 农业部果树育种技术重点实验室·河南省果树瓜类生物学重点实验室·中国农业科学院郑州果树研究所

【摘要】 【目的】为获得兼抗2种葡萄病毒的抗病植物新材料,【方法】利用Gateway技术成功构建了葡萄抗病毒双价RNAi表达载体。先采用RT-PCR分别克隆获得了葡萄卷叶病毒(GLRaV-3)和扇叶病毒(GFLV)外壳蛋白基因保守区段,用重叠延伸PCR方法串联获得了干扰片段GLRaV-GFLV(508 bp);通过TOPO克隆将该片段克隆入载体pENTR/SD/D构建了入门克隆载体pENTR/SD/D-GLRaV-GFLV;再经过LR反应使入门克隆载体pENTR/SD/D-GLRaV-GFLV上的干扰片段GLRaV-GFLV替换目标载体pH7GWIWG2(Ⅰ)上的ccdB基因,形成了含2种葡萄病毒基因片段的RNAi表达载体pH7GWIWG2(Ⅰ)-GLRaV-GFLV,用冻融法将其转入农杆菌菌株EHA105,以此作为工程菌进行转化烟草,【结果】经PCR鉴定证明目的片段已成功转入烟草中。【结论】研究基于Gateway技术的RNAi植物表达载体的构建和对烟草的遗传转化,为诱导转基因植物转录后基因沉默、获得抗2种病毒病的植物新材料提供了可能。

【关键词】 葡萄抗病毒RNAi植物表达载体烟草遗传转化
【基金】 国家自然科学基金资助项目(31071768)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2012年06期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2012.06.013
  • 【分类号】S663.1
  • 【被引频次】9
  • 【下载频次】450
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