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新疆红肉苹果PGIP基因的克隆及原核表达

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【作者】 孙华王春燕宋杨吴树敬张芮冯守千陈晓流陈学森

【Author】 SUN Hua,WANG Chun-yan,SONG Yang,WU Shu-jing,ZHANG Rui,FENG Shou-qian,CHEN Xiao-liu,CHEN Xue-sen(State Key Laboratory of Crop Biology,Shandong Agricultural University,Tai’an,Shandong 271018 China)

【机构】 山东农业大学作物生物学国家重点实验室

【摘要】 【目的】研究克隆新疆红肉苹果[Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck)Langenf]PGIP基因并进行原核表达,探讨其抗病机制。【方法】根据Genbank中已经发表的‘金冠’苹果PGIP保守区域设计1对特异引物,以新疆红肉苹果叶片总RNA为模板,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段连接到原核表达载体pET30a(+)中,构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。【结果】序列分析表明,新疆红肉苹果PGIP基因cDNA编码区全长993 bp,编码330个氨基酸残基,命名为MsPgip,GenBank登录号为JQ001783。MsPgip分子质量为36.6 kD,等电点为7.05,有6个潜在的N-糖基化位点,信号肽为N端24个氨基酸残基。该蛋白质还具有2个连续的24个氨基酸残基大小的LRR基序(LSQLKNLTFLDLSFNNLTGAIPSSLSQ LPNLNALHLDRN-KLTGHIPIS)。与已克隆的‘澳洲青苹’、‘金冠’、‘富士’苹果PGIP氨基酸序列同源性均高达99%。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达蛋白的分子质量与预期一致。【结论】克隆了新疆红肉苹果PGIP基因,并可在大肠杆菌中表达。

【基金】 国家重点基础研究发展计划课题(2011CB100606);国家自然科学基金项目(31171932)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2013年01期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2013.01.009
  • 【分类号】S661.1
  • 【被引频次】10
  • 【下载频次】552
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