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桃果实PpCuZnSOD基因的原核表达、纯化与鉴定

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【作者】 吴军帅丛丽君段艳欣董晓颖王滨李培环

【Author】 WU Jun-shuai,CONG Li-jun,DUAN Yan-xin,DONG Xiao-ying,WANG Bin,LI Pei-huan(College of Horticulture,Qingdao Agricultural University.Qingdao Key Lab of Modern Agriculture Quality and Safety Engineering,Qingdao,Shandong 266109 China)

【机构】 青岛农业大学园艺学院·青岛市现代农业质量与安全工程重点实验室

【摘要】 【目的】为了实现桃铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的高效表达,获得表达稳定、蛋白纯度高、活性强的工程菌,【方法】将前期获得的PpCuZnSOD基因(GenBank登录号:JX217743)重组到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)宿主菌,经IPTG进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测,镍柱亲和层析纯化,并采用Brad Ford方法测定融合蛋白浓度,黄嘌呤氧化法分析其酶活。【结果】成功的构建了原核表达载体pET-32a(+)-PpCuZnSOD,并获得分子质量约为35 kDa的诱导表达产物,纯化后融合蛋白浓度为183.7 mg·L-1,活性为5.23×103U·mg-1。【结论】成功构建了桃pET-32a(+)-PpCuZnSOD原核表达载体,表达量高、稳定性强,重组表达产物具有较高CuZnSOD酶活性,为桃CuZnSOD酶的进一步研究奠定了基础。

【关键词】 PpCuZnSOD原核表达纯化鉴定
【基金】 国家自然科学基金青年科学基金(NSFC,30900976);山东省高等学校科技计划(J12LF06)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2013年02期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2013.02.018
  • 【分类号】S662.1
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】232
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