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华东葡萄VpWDR基因的克隆、表达及亚细胞定位分析

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【作者】 武杰曾爱玲张军科

【Author】 WU Jie,ZENG Ai-ling,ZHANG Jun-ke(College of Horticulture,Northwest A & F University.Key Laboratory of Horticultural Plant Biology and Germplasm Innovation in Northwest China,Ministry of Agriculture,Yangling,Shaanxi 712100 China)

【机构】 西北农林科技大学园艺学院·农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室

【摘要】 【目的】探索中国葡萄野生种抗白粉病候选基因VpWDR与白粉病抗性的相关性。【方法】以中国野生华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)叶片为植物材料,采用RACE技术对华东葡萄抗白粉病株系‘白河-35-1’叶片cDNA文库测序获得的WDR基因EST序列片段进行全长克隆,利用实时荧光定量PCR技术分析VpWDR在华东葡萄抗白粉病株系‘白河-35-1’叶片中受白粉菌侵染后的表达变化,采用基因枪介导的瞬时转化技术检测VpWDR表达产物在洋葱表皮细胞内的定位。【结果】获得了华东葡萄VpWDR mRNA全长1 577 bp,开放阅读框1 377 bp,3’UTR 138 bp,5’UTR 62 bp,编码458个氨基酸,理论等电点为5.07,预测分子量为51.7 kDa;核酸和编码的氨基酸序列同源性分析结果表明,VpWDR属于WD40蛋白基因家族,并命名为VpWDR;在人工接种葡萄白粉菌后的葡萄叶片进行基因表达分析,表明该基因在葡萄叶片中受白粉菌诱导先上调表达,再回到原始水平,最大值出现在接种后12 h,表达量约为内参基因β-Actin的2.8倍;此外,亚细胞定位结果表明该基因编码的蛋白定位于细胞核、细胞质和细胞膜,无亚细胞特异性分布。【结论】VpWDR蛋白定位于细胞核、细胞质和细胞膜位。并且VpWDR基因对白粉菌产生响应,从而推测该基因可能参与葡萄白粉菌侵染过程中的抗病反应。

【基金】 西北农林科技大学基本科研业务费专项(QN2009014);国家自然科学基金(No30771493)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2013年03期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2013.03.008
  • 【分类号】S663.1
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】279
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