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华东葡萄转录因子VpSBP3基因原核表达、纯化及多克隆抗血清制备

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【作者】 王浩侯鸿敏殷向静宋军阳王西平

【Author】 WANG Hao;HOU Hong-min;YIN Xiang-jing;SONG Jun-yang;WANG Xi-ping;Key Laboratory of Horticultural Plant Biology and Germplasm Innovation in Northwest China,Ministry of Agriculture·College of Horticulture,Northwest A&F University·State Key Laboratory of Crop Stress Biology in Arid Areas·Northwest A&F University;

【机构】 西北农林科技大学园艺学院·农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点开放实验室旱区作物逆境生物学国家重点实验室·西北农林科技大学

【摘要】 【目的】制备华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)转录因子VpSBP3基因抗血清,为研究VpSBP3基因功能奠定基础。【方法】构建华东葡萄转录因子VpSBP3基因重组原核表达载体pGEX-VpSBP3,转化大肠杆菌(E.coli)Rosetta(DE3),以IPTG为诱导剂诱导目的融合蛋白的表达。切胶电透析回收诱导表达的VpSBP3融合蛋白免疫新西兰兔,制备VpSBP3抗血清。【结果】重组原核表达载体pGEX-VpSBP3在DE3中高效表达出了分子质量为68 kD的GSTVpSBP3融合蛋白。回收的目的融合蛋白免疫新西兰兔后得到了抗血清,经Western-Blot检测,抗血清的免疫-抗原反应良好。【结论】在27℃、0.7 mmol·L-1IPTG过夜培养的诱导条件下,融合蛋白GST-VpSBP3过量表达。免疫大白兔获得的血清特异性强,效价高,可用于VpSBP3基因功能分析。

【基金】 国家自然科学基金(31071782);基本科研业务费科技创新专项(QN2011056)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2013年05期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2013.05.026
  • 【分类号】S663.1
  • 【下载频次】87
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