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柑橘碎叶病毒外壳蛋白基因的原核表达

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【作者】 段硕李敏陶珍珍宋震李中安周常勇

【Author】 DUAN Shuo;LI Min;TAO Zhen-zhen;SONG Zhen;LI Zhong-an;ZHOU Chang-yong;Plant Protection College,Southwest University;National Citrus Engineering Research Center,Citrus Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences;

【机构】 西南大学植物保护学院国家柑橘工程技术研究中心

【摘要】 【目的】获得原核表达的柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)的外壳蛋白(Coat protein,CP)。【方法】以感染CTLV的柑橘叶片总RNA为模板,根据已报道CTLV设计引物,运用一步法RT-PCR对CTLV的CP进行扩增并克隆,并将CP克隆至表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得表达蛋白。【结果】扩增测序结果显示,克隆产物CP区域序列全长714 bp,与已报道CP核苷酸序列(GenBank序列号:FJ223212)相似性达100%,推测编码238个氨基酸,表达蛋白的大小约27 kD。重组质粒经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒高效表达约30 kD蛋白,酶联免疫吸附(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测结果表明,该蛋白稀释5000倍仍能与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)抗体发生阳性反应,证实表达蛋白为CTLV的CP。【结论】克隆了CTLV的CP,通过原核表达系统高效表达了CTLV的CP,为制备CTLV抗体奠定了基础。

【关键词】 柑橘碎叶病毒CP原核表达蛋白纯化
【基金】 重庆市自然科学基金(CSTC,2010BB1150);公益性(农业)行业专项(果树病毒病防控技术研究与示范,201203076);教育部创新团队(IRT0976)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2013年05期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2013.05.013
  • 【分类号】S436.66
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】83
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