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葡萄iPBS-PCR反应体系的优化

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【作者】 张潇玉郭大龙郭明晓张国海侯小改

【Author】 ZHANG Xiao-yu;GUO Da-long;GUO Ming-xiao;ZHANG Guo-hai;HOU Xiao-gai;College of Forestry,Henan University of Science & Technology;College of Agriculture,Henan University of Science & Technology;

【机构】 河南科技大学林学院河南科技大学农学院

【摘要】 【目的】iPBS标记是一种新型、快速、高效的分子标记方法,试验筛选并优化了葡萄的iPBS-PCR反应体系,以建立葡萄种质资源评价和品种鉴定的可靠方法。【方法】采用L16(45)正交试验,对影响葡萄iPBS-PCR反应的模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶用量、引物用量及退火温度等因素进行了优化,运用Bandscan和正交设计助手等软件对电泳结果条带进行统计分析。【结果】优化后的葡萄iPBS-PCR扩增的最佳反应条件为:DNA模板20 ng、Taq酶1.00 U、Mg2+2.40 mmol·L-1、引物0.50μmol·L-1、dNTPs 0.20 mmol·L-1,总体积20μL。退火温度53.8℃。【结论】建立了适合葡萄iPBS-PCR分析的优化反应体系,为葡萄种质遗传多样性的评价和鉴定提供了新的技术手段,为其他植物的相关研究也提供了参考。

【关键词】 葡萄iPBS正交设计体系优化
【基金】 国家自然科学基金(NSFC:31372026);河南省高校科技创新人才支持计划(13HASTIT004);河南省重点科技攻关项目(132102110029);河南科技大学研究生创新基金(CXJJ-YJS-Z021)
【所属期刊栏目】 技术与方法 (2014年03期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2014.03.011
  • 【分类号】S663.1
  • 【被引频次】9
  • 【下载频次】203
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