节点文献

‘泽西’越橘VcDFR基因的克隆与表达分析

免费订阅

【作者】 宋杨窦连登张红军张志东李亚东

【Author】 SONG Yang;DOU Lian-deng;ZHANG Hong-jun;ZHANG Zhi-dong;LI Ya-dong;Research Institute of Pomology,Chinese Academy of Agricultural Sciences·Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Horticultural Crops (Germplasm Resources Utilization),Ministry of Agriculture,P.R.China;College of Horticulture,Jilin Agricultural University;

【通讯作者】 Author for correspondence (

【机构】 中国农业科学院果树研究所·农业部园艺作物种质资源利用重点实验室吉林农业大学园艺学院

【摘要】 【目的】克隆‘泽西’越橘的VcDFR基因,对其进行表达模式分析,构建VcDFR基因的原核表达载体并在大肠杆菌DE3中诱导表达,为探讨越橘VcDFR基因的表达与花青苷生物合成之间的关系奠定基础。【方法】以越橘果实总RNA为模板,利用同源克隆法获得越橘VcDFR基因。利用实时定量RT-PCR分析VcDFR基因在‘泽西’越橘不同组织器官中和果实发育过程中的相对表达量,并测定不同组织中和果实发育过程中的花青苷含量。将获得的越橘VcDFR基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,构建原核表达载体pET-30a(+)-VcDFR,在大肠杆菌DE3中诱导表达。【结果】从越橘果实中克隆到1条VcDFR基因。序列分析显示VcDFR基因具有保守的NADPH结合域和底物特异结合区。实时定量RT-PCR分析表明,VcDFR在枝条、叶片、果肉、果皮和花中均能表达,但在不同组织中的相对表达量差异明显,在果肉和果皮中表达量较高。与其他组织器官相比较,果肉和果皮中花青苷含量较高。在果实发育过程中,随着VcDFR表达的升高,果肉中花青苷含量呈递增的趋势。使用SDS-PAGE电泳和Western-blot检测构建的融合表达蛋白,结果表明融合表达的VcDFR蛋白与预期大小一致。【结论】‘泽西’越橘果实中VcDFR的表达与花青苷的生物合成有一定关系,VcDFR的表达促进了花青苷含量的增加。VcDFR在大肠杆菌中的融合表达,为进一步鉴定该蛋白及研究其功能奠定了基础。

【基金】 国家自然科学基金(31301754);中国农业科学院基本科研业务费预算增量项目(2013ZL018);吉林省财政厅育种项目(2012004);农业部公益性行业(农业)科研专项(201103037);吉林省科技发展项目(20080713)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2014年05期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20140217
  • 【分类号】S663.9
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】164
节点文献中: 

本文链接的文献网络图示:

浏览历史:
下载历史: