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‘小白杏’自交不亲和SFB基因RNAi表达载体的构建

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【作者】 刘海楠冯建荣罗明刘小芳李文慧白茹

【Author】 LIU Hainan;FENG Jianrong;LUO Ming;LIU Xiaofang;LI Wenhui;BAI Ru;College of Agriculture,Shihezi University·Xinjiang Production and Construction Corps Key Laboratory of Special Fruits and Vegetables Cultivation Physiology and Germplasm Resources Utilization;Biotechnology Research Center,Southwest University·Key Laboratory of Biotechnology and Crop Quality Improvement,Ministry of Agriculture;

【机构】 石河子大学农学院·特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室西南大学生物技术中心·农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室

【摘要】 【目的】应用RNA干扰(RNAi)技术在分子水平调控杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础。【方法】基于南疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiaobaixing’)花粉决定子SFB(S-haplotype-specific Fbox protein)基因3’端c DNA全长序列,选取SFB基因变异区上游距起始密码子61 bp处、大小为29 bp的片段作为干扰序列,棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR(Fusion PCR)构建SFB基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihp RNA),再酶切连接到植物表达载体p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII上,构建SFB基因RNAi表达载体;用冻融转化法将重组质粒转化至农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中。【结果】测序结果表明臂长29 bp、茎环242 bp的SFB基因ihp RNA结构融合成功,双酶切检验和PCR验证结果表明,该结构正确地插入p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的启动子和终止子之间,说明SFB基因的RNAi表达载体p CAMBIA-RNAi-SFB构建成功;PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌LBA4404中。【结论】研究结果表明,应用融合PCR结合酶切连接的方法构建SFB基因的RNAi表达载体是可行的,为RNAi技术在果树自交不亲和性状改良上的应用创造了条件。

【关键词】 自交不亲和SFB基因RNAi表达载体
【基金】 国家自然基金面上项目(31272129)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2016年02期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20150297
  • 【分类号】S662.2
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】174
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