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梨SCoT-PCR反应体系的优化及‘库尔勒香梨’营养系变异鉴定

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【作者】 和世玉牛建新马建江

【Author】 HE Shiyu;NIU Jianxin;MA Jianjiang;Department of Horticulture,College of Agricultural,Shihezi University;Xinjiang Production and Construction Corps Key Laboratory of Special Fruits and Vegetables Cultivation Physiology and Germplasm Resources Utilization;Nanyang Vocational College of Agriculture;Agricultural Research Institute,Agricultural Division 2,Xinjiang Production and Construction Corps;

【机构】 石河子大学农学院园艺系特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室南阳农业职业学院新疆生产建设兵团第二师农科所

【摘要】 【目的】建立稳定性好、可重复性强、多态性扩增效果好的‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系,证明SCoT分子标记可以用于梨属植物优良营养系的鉴定。【方法】以新疆库尔勒农二师29团、33团和34团的‘库尔勒香梨’优良营养系为试材,通过L25(56)正交试验设计对‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系进行筛选,并对扩增反应程序进行优化,运用正交设计直观分析法和正交设计助手Ⅱ软件对正交设计扩增结果进行分析,从筛选出的20个引物中随机选择2条引物对24份材料扩增,用DNAMAN、Editseq、ORF Finder和NCBI-BLAST-tblastx对测序结果分析。【结果】优化后的香梨SCoT-PCR 20μL反应分析体系含(2.5 mmol·L-110×buffer with Mg2+)2.5μL、Taq酶1.5 U、引物10μmol·L-1、模板DNA25 ng、dNTPs 1.6 mmol·L-1。反应程序为94℃预变性4 min;94℃变性1 min,52℃退火45 s,72℃延伸1 min,30次循环;72℃延伸8 min。对测序结果分析表明:扩增产物的大小为2002 000 bp,23份材料与对照材料存在单碱基的缺失,利用单碱基变异可以区分出24份材料,说明18份优良营养系材料发生了遗传变异。【结论】SCoT分子标记可用于梨树营养系变异的鉴定。

【基金】 兵团“科技人员服务南疆专项”(2010GG59);兵团科技攻关计划(2011BA003-3)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2016年11期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20150542
  • 【分类号】S661.2
  • 【被引频次】6
  • 【下载频次】110
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