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苹果MdRCD1基因的表达分析以及功能的初步鉴定

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【作者】 李浩浩曲丰佳安建平李睿郝玉金王小非由春香

【Author】 LI Haohao;QU Fengjia;AN Jianping;LI Rui;HAO Yujin;WANG Xiaofei;YOU Chunxiang;College of Horticulture Science and Engineering, Shandong Agricultural University·State Key Laboratory of Crop Biology, MOA Key Laboratory of Horticultural Crop Biology (Huanghuai Region) and Germplasm Innovation;

【机构】 山东农业大学园艺科学与工程学院·作物生物学国家重点实验室·农业部黄淮地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室

【摘要】 【目的】分离克隆苹果MdRCD1基因,分析其蛋白结构和逆境响应,并初步鉴定MdRCD1在苹果愈伤中的功能。【方法】同源克隆MdRCD1并测序,用DNAman和MEGA5相关软件分析MdRCD1氨基酸序列以及进化关系,不同逆境处理‘嘎拉’苹果组培苗,qRT-PCR分析MdRCD1在逆境条件下的表达量。农杆菌介导的遗传转化方法获得过量表达MdRCD1的转基因愈伤,不同盐浓度处理野生型和转基因愈伤,观察愈伤的长势,检测愈伤的鲜质量、脯氨酸和丙二醛含量,鉴定MdRCD1的初步功能。【结果】从‘嘎拉’苹果中克隆了MdRCD1(MDP0000234325)基因。该基因ORF为1 803 bp。通过进化树和蛋白同源性分析,表明苹果MdRCD1和中国白梨PbRCD1进化亲缘关系最近。在MdRCD1的N端有1个保守的WWE结构域,1个PARP催化中心,在C端有1个RST结构域。qRT-PCR实验表明MdRCD1在苹果各个组织器官中都有表达,在茎中的表达量高于其他组织;同时MdRCD1的表达受Na Cl、ABA、渗透胁迫等逆境胁迫的诱导。通过农杆菌侵染获得过量表达MdRCD1转基因苹果愈伤。盐胁迫处理条件下,过量表达MdRCD1的抗性明显提高。【结论】MdRCD1在进化过程中比较保守,苹果不同组织中都有表达,过量表达MdRCD1苹果愈伤的抗盐性得到提高。

【关键词】 苹果MdRCD1基因克隆表达分析盐胁迫
【基金】 农业部公益性行业科研专项(21203075-3);国家自然科学基金(31471854);国家自然科学基金(重点项目)(31430074)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2017年05期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20160320
  • 【分类号】S661.1
  • 【下载频次】336
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