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柑橘体细胞胚发生基因CsHB1特异肽段多克隆抗体的制备及其蛋白动态检测

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【作者】 谢幸男赖晓娜战爽程来超许全全葛晓霞

【Author】 XIE Xingnan;LAI Xiaona;ZHAN Shuang;CHENG Laichao;XU Quanquan;GE Xiaoxia;Center of Applied Biotechnology, Wuhan Institute of Bioengineering;College of Horticulture & Forestry Sciences, Huazhong Agricultural University;

【机构】 武汉生物工程学院应用生物技术研究中心华中农业大学园艺林学学院

【摘要】 【目的】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础。【方法】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N,转化大肠杆菌诱导目的融合蛋白的表达,并制备获得多克隆抗体anti-CsHB1-N。通过Western blot检测抗体在原核表达系统和柑橘体细胞胚诱导阶段的特异性,并分析体细胞胚诱导阶段CsHB1蛋白水平表达的动态变化。【结果】重组原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N在Escherichia coli中高效表达出了分子质量约为49 ku的GST-CsHB1-N融合蛋白,并纯化获得多克隆抗体anti-CsHB1-N;经过Western blot分析表明,多克隆抗体可与‘伏令夏橙’愈伤体胚诱导阶段表达的目的蛋白特异结合;蛋白表达结果分析表明,在胚性愈伤组织中CsHB1蛋白呈现高的表达量,随着诱导培养的进行,呈现了先下降后上升的波动变化。【结论】多克隆抗体特异性好,可与‘伏令夏橙’胚性愈伤组织中目的蛋白特异性结合,可用于CsHB1基因功能分析。

【关键词】 柑橘CsHB1多克隆抗体动态分析
【基金】 国家自然科学基金青年基金(31201611);湖北省自然科学基金(2016CFB390)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2017年09期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20170022
  • 【分类号】S666
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】106
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