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草莓AP2/ERF转录因子AD-cDNA文库的构建

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【作者】 肖宇玮张圆圆张祖瑛李绍佳殷学仁陈昆松

【Author】 XIAO Yuwei;ZHANG Yuanyuan;ZHANG Zuying;LI Shaojia;YIN Xueren;CHEN Kunsong;Institute of Fruit Science, College of Agriculture and Biotechnology, Zhejiang University;

【机构】 浙江大学农业与生物技术学院果树研究所

【摘要】 【目的】探究AP2/ERF家族成员在果实成熟过程中发挥的作用。【方法】利用CTAB法提取栽培草莓(Fragaria×ananassa)品种‘越心’的果实RNA,逆转录第1链c DNA;根据AP2 DNA-binding domain序列信息利用CDART工具在Genbank中获得草莓中所有AP2/ERF家族成员的序列信息,设计基因编码区全长引物并获得所有家族成员全长序列;将AP2/ERF家族成员基因全长序列从测序载体p GEM-T easy转移至p GADT7载体上,转化至大肠杆菌并保存菌株,构建完整的AP2/ERF AD-c DNA文库;参照YeastmakerTMyeast transformation system2(Clontech)说明书,利用Dk PDC2启动子进行文库筛选和单一验证。【结果】从数据库获得了草莓(Fragaria×ananassa)基因组120个非冗余AP2/ERF家族成员基因全长序列,通过设计的7条引物将AP2/ERF家族成员基因全长序列从测序载体p GEM-T easy转移至p GADT7载体上,转化至大肠杆菌并保存菌株,构建了完整的AP2/ERF的AD-c DNA文库。利用已报道能与Dk ERF19互作的柿子基因Dk PDC2启动子对该文库进行酵母单杂交筛选,获得了2个草莓AP2/ERF家族成员Fa ERF#83和Fa ERF#87,且证明了两者均能与Dk PDC2启动子互作。【结论】成功构建了一个只含有草莓AP2/ERF转录因子全长序列的AD-c DNA文库,用Dk PDC2启动子进行筛选获得了Dk ERF19直系同源基因Fa ERF#87和同亚家族基因Fa ERF#83,证明了该文库的有效性,也为进一步研究潜在的AP2/ERF调控提供了手段。

【基金】 国家重点研发项目(2016YFD0400101);111项目(B17039)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2018年07期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20170468
  • 【分类号】S668.4
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】263
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