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杜梨不同组织总RNA提取方法比较及质量分析

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【作者】 庞宏光许建锋张江红张玉星亓宝秀

【Author】 PANG Hongguang;XU Jianfeng;ZHANG Jianghong;ZHANG Yuxing;QI Baoxiu;College of Horticulture,Hebei Agricultural University;Beijing Collaborative Innovation Center for Eco-Environmental Improvement with Forestry and Fruit Trees;

【通讯作者】 张玉星;亓宝秀;

【机构】 河北农业大学园艺学院北京林果业生态环境功能提升协同创新中心

【摘要】 【目的】针对杜梨组织中富含多酚、多糖等次生代谢物质特点,筛选从杜梨不同组织中提取高质量RNA的方法。【方法】以杜梨不同组织(根、茎、叶、花和果)为材料,分别采用Trizol法、改良CTAB法和RNAprep Pure Plant Kit试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳和NanoDrop 2000微量分光光度计对RNA进行质量检测。【结果】3种方法均能提出杜梨不同组织中总RNA,但RNAprep Pure Plant Kit法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性较好,根、茎、叶、花和果提取的RNA纯度分别为2.07、2.02、2.01、2.01和2.02;浓度分别为186.2 ng·μL-1、174.5 ng·μL-1、163.6 ng·μL-1、167.3 ng·μL-1和121.1 ng·μL-1。以RNAprep Pure Plant Kit试剂盒法提取的总RNA反转录成cDNA为模板,内参基因PbUBI为目的基因进行RT-PCR扩增,均可获得明亮单一条带。【结论】RNAprep Pure Plant Kit试剂盒法更适用于杜梨不同组织总RNA提取,可为下一步进行基因克隆及功能验证等分子生物学研究奠定基础。

【关键词】 杜梨不同组织总RNA纯度浓度
【基金】 科技创新服务能力建设-科研基地-林果业生态环境功能提升协同创新中心(CEFF-PXM2018_014207_000024)
【所属期刊栏目】 研究报告 (2018年S1期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2018.S.11
  • 【分类号】S661.2
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】204
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