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流式细胞仪测定荔枝倍性和基因组大小的细胞核提取液筛选与应用

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【作者】 赖彪吴传龙秦永华刘成明冯奇瑞叶自行胡桂兵王惠聪

【Author】 LAI Biao;WU Chuanlong;QIN Yonghua;LIU Chengming;FENG Qirui;YE Zixing;HU Guibing;WANG Huicong;School of Advanced Agriculture and Bioengineering,Yangtze Normal University;College of Horticulture,South China Agricultural University;

【通讯作者】 王惠聪;

【机构】 长江师范学院现代农业与生物工程学院华南农业大学园艺学院

【摘要】 【目的】流式细胞术是目前测定植物倍性和基因组大小差异的最快、最有效的方法。建立适合荔枝的流式细胞术的方法,对荔枝倍性育种以及基因组大小的确定是必不可少的。【方法】笔者以荔枝的幼嫩叶片为材料,筛选适合荔枝的细胞核提取液配方,建立利用流式细胞仪测定荔枝倍性和基因组大小的方法。用改进的标准两步法,比较了6种常用细胞核提取液提取细胞核的效果。【结果】利用WPB(Woody Plant Buffer)提取的大部分荔枝品种(品系)叶片细胞核稳定、分辨率高、细胞碎片少且细胞G0/G1峰的变异系数(CV)较低,平均CV值为5.12%,说明该配方适用于酚类物质丰富的荔枝细胞核的提取。同时以已知染色体数量的‘无核荔’(2n=30)为外标,检测了18个品种(品系)的倍性,发现参测样品的G0/G1峰与‘无核荔’G0/G1峰的荧光均值的比值为0.78~1.24,说明所测荔枝品种(品系)均为二倍体。以已知基因组大小的‘Stupicképolnírané’番茄为内标测定了14个品种(品系)的基因组大小,结果表明荔枝基因大小约为550~620 Mb,平均602 Mb,不同荔枝品种(品系)间基因组大小存在一定差异。【结论】WPB细胞核提取液提取的荔枝幼嫩的叶片的细胞核质量好,可用于流式细胞术荔枝倍性和基因组大小的测定,测定的结果显示参测荔枝品种(品系)均为二倍体,无单倍或多倍的情况,不同荔枝品种基因组大小有一定的差异。

【基金】 国家现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目“国家荔枝龙眼产业技术体系”(CARS-33);长江师范学院校级科研项目(2016KYQD20和2016XJQN06)
【所属期刊栏目】 技术与方法 (2019年07期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20190015
  • 【分类号】S667.1
  • 【下载频次】401
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