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发根农杆菌介导西瓜转基因过表达体系的建立

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【作者】 王平勇徐永阳赵光伟贺玉花孔维虎张健刘水苗户克云侯冲王兰菊徐志红

【Author】 WANG Pingyong;XU Yongyang;ZHAO Guangwei;HE Yuhua;KONG Weihu;ZHANG Jian;LIU Shuimiao;HU Keyun;HOU Chong;WANG Lanju;XU Zhihong;Zhengzhou Fruit Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences;College of Horticulture of Henan Agricultural University;

【通讯作者】 王兰菊;徐志红;

【机构】 中国农业科学院郑州果树研究所河南农业大学园艺学院

【摘要】 【目的】建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系。【方法】探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料’Sugar Baby’,诱导西瓜产生不定根的实验方法。借助该方法,将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599,侵染西瓜材料’Sugar Baby’,通过常规PCR、qRTPCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测,评价该过表达体系的效果。【结果】利用野生型和导入外源质粒的发根农杆菌均能成功诱导西瓜’Sugar Baby’产生不定根。PCR检测结果显示,携带pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper载体的发根农杆菌K599诱导产生的不定根阳性率达到100%。qRT-PCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测均能成功检测到GUS基因和EGFP基因的过量表达。【结论】利用发根农杆菌K599诱导西瓜产生不定根介导基因过表达的方法,具有周期短,操作方便,转化率高的特点,可实现基因功能的快速验证,为西瓜根系相关基因的功能研究提供技术支持。

【关键词】 西瓜发根农杆菌K599过表达
【基金】 国家自然科学基金(31801888);国家西甜瓜产业技术体系项目(CARS-25);中国农业科学院科技创新工程专项经费项目(CAAS-ASTIP-2019-ZFRI);河南省现代农业产业技术体系项目(S2014-11-G03);中央级科研院所基本科研业务费专项(1610192019201)
【所属期刊栏目】 技术与方法 (2019年12期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20190454
  • 【分类号】S651
  • 【下载频次】240
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