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香蕉miR408b靶基因Chemocyanin的克隆及其在低温胁迫下的表达分析

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【作者】 刘彦英倪珊珊项蕾蕾孙雪丽陈裕坤赖钟雄

【Author】 LIU Yanying;NI Shanshan;XIANG Leilei;SUN Xueli;CHEN Yukun;LAI Zhongxiong;Institute of Horticultural Biotechnology, Fujian Agriculture and Forestry University;

【通讯作者】 赖钟雄;

【机构】 福建农林大学园艺植物生物工程研究所

【摘要】 【目的】研究香蕉中miR408b及其靶基因Chemocyanin在低温胁迫下的表达模式和调控机制。【方法】以三明野生蕉和‘天宝蕉’叶片为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆获得三明野生蕉中的MiChemocyanin基因(MiCHY)和‘天宝蕉’中的MaChemocyanin基因(MaCHY),利用在线网站对MiCHY进行生物信息学分析。【结果】MiCHY基因的cDNA全长为587 bp,开放阅读框381 bp,编码126个氨基酸蛋白,具有Plantacyanin结构域,属于超铜氧化还原蛋白家族。在ORF区的4~24 bp处有一处高度匹配miR408b的结合区(GCTCAGGGAAGGGGCAGTGCG)。RLM-5’RACE分析表明,miR408b主要在靶序列的第7~8个碱基之间剪切靶基因MiCHY的mRNA。序列比对发现,MaCHY基因比MiCHY基因多了82 bp的序列,符合内含子的GT-AG剪切,推测发生了内含子驻留的可变剪接。保守结构域分析表明MaCHY没有Plantacyanin结构域,但也属于铜氧化还原蛋白家族。qRT-PCR结果表明,低温胁迫下,冷敏感的‘天宝蕉’miR408b的表达量上升,MaCHY的表达量降低;在抗寒的三明野生蕉中,miR408b的表达量下降,MiCHY表达量上升,miR408b与MiCHY表达量呈负相关。【结论】miR408b及其靶基因MiCHY可能在香蕉响应低温胁迫中发挥重要作用。

【关键词】 香蕉miR408bChemocyanin基因低温胁迫表达分析
【基金】 国家重点研发计划(2019YFD1000901);国家现代农业产业技术体系(香蕉)专项资金(GARS-31-15);福建省高原学科建设经费(102/71201801101);福建农林大学科技创新专项基金(CXZX2018076)
【所属期刊栏目】 种质资源·遗传育种·分子生物学 (2020年01期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.20190286
  • 【分类号】S668.1
  • 【下载频次】139
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