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紫草素通过内质网应激蛋白抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞增殖的研究

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【作者】 缪明星黄莉莉王欣

【Author】 MIAO Ming-xing;HUANG Li-li;WANG Xin;School of Pharmacy, China Pharmaceutical University;Department of Pharmacy, the Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School;

【通讯作者】 黄莉莉;

【机构】 中国药科大学药学院南京大学医学院附属鼓楼医院药剂科

【摘要】 目的研究紫草素对人骨肉瘤U-2 OS细胞存活的抑制和对内质网应激蛋白的调控机制。方法采用CCK-8法检测0.156 25~4μmol/L紫草素对人骨肉瘤U-2 OS细胞抑制率;取对数生长期U-2 OS细胞,分别给予0~4μmol/L紫草素诱导U-2 OS细胞凋亡,24 h后用流式细胞术检测细胞凋亡率;通过Western blotting检测紫草素对内质网应激蛋白ATF6、IRE1α、ATF4、GRP78的表达调控作用;将混有质粒或小干扰RNA的Lipofectamine 2000试剂处理U-2 OS细胞6 h换液,加入紫草素处理,检测ATF4或GRP78对紫草素处理的细胞活力的影响;将ATF4或空白质粒(3μg)、GRP78报告质粒(3μg)和海肾内参质粒(4μg)均匀混合,用Lipofectamine 2000试剂对人骨肉瘤U-2 OS细胞进行转染,6 h换液,加入0.8μmol/L紫草素继续孵育24h,实验结果用各孔海肾荧光做参比进行校正,检测紫草素对ATF4介导的GRP78转录的调控作用。结果紫草素显著抑制人骨肉瘤细胞的活力并能浓度相关性促进细胞凋亡;Westernblotting结果显示,紫草素能特异性增加ATF4和GRP78蛋白的表达;过表达ATF4能显著抑制U-2 OS细胞活力(P<0.01);敲低ATF4能部分逆转紫草素对细胞活力的抑制(P<0.01);过表达GRP78并不影响紫草素对细胞存活的抑制效果,但敲低GRP78可以显著增加紫草素对U-2 OS细胞活力的抑制(P<0.01);报告基因结果显示紫草素能增加ATF4对GRP78基因的转录调控。结论紫草素能显著抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞活力,诱导内质网应激蛋白的表达,敲低GRP78能进一步增加紫草素的细胞毒性。

【关键词】 紫草素U-2 OS细胞凋亡率内质网应激ATF6IRE1αATF4GRP78
【基金】 江苏省中医药管理局科技项目(YB2017046)
【所属期刊栏目】 实验研究 (2019年10期)
  • 【分类号】R285.5
  • 【下载频次】25
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