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慢性粒细胞白血病MGMT基因的克隆及逆转录病毒表达载体的构建

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【作者】 肖芸任志娟张维孙等军陈剑吴镇宇张旭方琴王季石

【Author】 XIAO Yun 1,2 , REN Zhi juan 2, ZHANG Wei 2, SUN Deng jun 3, CHEN Jian 2, WU Zhen yu 3, ZHANG Xu 2, FANG Qin 3, WANG Ji shi 2 (1.Department of Clinical Hematology, Faculty of Clinical Laboratory Science of Guiyang Medical College, Guiyang 550004;2.Department of Hematology, Affiliated Hosptial of Guiyang Medical College, Guiyang 550004; 3.Department of Pharmaceutics, Affiliated Hosptial of Guiyang Medical College, Guiyang 550001,China)

【机构】 贵阳医学院检验系临床血液学教研室贵阳医学院附院血液内科贵阳医学院附院药剂科贵阳医学院附院血液内科 贵州贵阳550004贵州贵阳550004贵州贵阳550004

【摘要】 目的 :从慢性粒细胞白血病病人外周血中克隆人MGMT基因 ,并进行逆转录病毒表达载体的构建。方法 :用RT PCR方法从慢性粒细胞白血病病人外周血白细胞中克隆得到长为 6 84bpMGMTcDNA。将该片段与 pGEM T载体连接 ,转化大肠杆菌DH5后得到重组质粒 pGEM T MGMT ,进行限制性内切酶酶切分析、PCR及测序鉴定。再将MGMTcDNA亚克隆到G1Na逆转录病毒载体EcoRⅠ和xhoⅠ位点之间 ,并进行酶切、PCR鉴定。结果 :成功克隆了人MGMT基因 ,经酶切分析、PCR初步筛选及测序鉴定证实序列正确 ,并成功构建到逆转录病毒载体上。结论 :通过克隆人MGMT基因 ,并构建逆转录病毒载体G1Na MGMT ,为探讨将耐药基因导入造血干细胞对烷化剂类化疗药物抗性的研究奠定了基础。

【关键词】 血白病,髓样,慢性基因表达病毒
【基金】 贵州省科委基金资助项目(D2 0 0 0 5)
  • 【DOI】10.19367/j.cnki.1000-2707.2002.06.001
  • 【分类号】R733.72
  • 【下载频次】31
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