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串联重复核定位信号的绿色荧光蛋白融合载体的构建与原核表达

邓鹏陈腾祥龚小卫

南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室

摘要:目的:构建绿色荧光蛋白-串联重复核定位信号融合蛋白的表达载体(His-EGFP-3xNLS),并在原核细胞中进行表达与纯化。方法:采用PCR方法从原先克隆在pEGFP-C1载体中的3xNLS与EGFP编码序列扩增出来,使用常规酶切和连接方法将其重组至pET-14b载体中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用IPTG诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果:构建的His-EGFP-3xNLS融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36 kD的融合蛋白。结论:成功构建了His-EGFP-3xNLS融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究NLS介导信号分子入核提供了实验材料。
  • DOI:

    10.19367/j.cnki.1000-2707.2008.04.005

  • 专辑:

    医药卫生科技; 基础科学

  • 专题:

    生物学

  • 分类号:

    Q782

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