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摘要:目的:克隆抑制腺苷酸环化酶G蛋白(Gi蛋白)3个亚基α、β和γ基因,构建p EYFP-N-Giα1和p ECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,完成其在真核细胞中的表达检测。方法:培养肝癌细胞Hep G2,提取总RNA后反转录成c DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增α、β和γ的编码基因,在α亚基两端添加酶切位点,在β和γ亚基两端分别添加酶切位点和连接肽,经酶切和连接得到Giα1和Giβ1-γ2,再将Giα1和Giβ1-γ2基因分别构建到荧光蛋白报告载体p EYFP-N1和p ECFP-C1中,利用脂质体法将真核表达载体转染到肝癌细胞中,激光共聚焦显微镜观察分析其表达活性。结果:PCR扩增获得Gi蛋白α、β和γ亚基的编码基因,在两端添加酶切位点和连接肽后获得的Giα1和Giβ1-γ2基因,成功构建了p EYFP-N-Giα1和p ECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,并在肝癌细胞中实现其真核细胞表达。结论:成功构建Gi蛋白的真核表达载体,并鉴定其在活细胞中具有表达活性。
  • DOI:

    10.19367/j.cnki.1000-2707.2014.06.003

  • 专辑:

    医药卫生科技; 基础科学

  • 专题:

    生物学

  • 分类号:

    Q78

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