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家蝇u93基因的原核表达与体外抗菌活性检测

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【作者】 马素贞王涛龙慧玲国果杨阳常振策王兵吴建伟

【Author】 MA Suzhen;WANG Tao;LONG Huiling;GUO Guo;YANG Yang;CHANG Zhence;WANG Bing;WU Jianwei;Department of Parasitology,Guizhou Medical University;Department of Microbiology,Guizhou Medical University;Key Laboratory of Pathogenic Biology of Guizhou Higher Education Institutions,Guizhou Medical University;Department of Biotechnology,Guizhou Medical University;

【通讯作者】 吴建伟;

【机构】 贵州医科大学寄生虫学教研室贵州医科大学贵州医科大学微生物学教研室贵州医科大学贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州医科大学生物技术教研室

【摘要】 目的:构建家蝇u93基因原核表达体系,检测重组表达产物的体外抗菌活性。方法:采用生物信息学方法,分析u93基因编码蛋白的理化特性;将前期构建的p ET29a-u93重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21/DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白并通过SDS-PAGE对表达产物进行分析;纯化重组蛋白,采用微量稀释法检测u93重组蛋白的体外抗菌活性。结果:生物信息学分析显示,u93编码基因开放阅读框全长363 bp,共编码120个氨基酸,理论分子量为13. 35 k D,等电点为7. 52,信号肽位于1~20位氨基酸之间;u93重组蛋白在大肠杆菌BL21/DE3中主要以包涵体形式表达,重组蛋白的相对分子质量与理论值相一致; u93重组蛋白对白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)为21 mg/L、对近平滑念珠菌MIC为12. 5 mg/L、对克柔念珠菌MIC为12. 5 mg/L、对热带念珠菌MIC为12. 5 mg/L,但不能抑制金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌的生长繁殖。结论:成功构建u93原核表达系统,重组表达的u93蛋白对念珠菌具有较强的抑杀活性。

【关键词】 家蝇u93基因原核表达抗菌活性
【基金】 国家自然科学基金项目(No81360254);贵阳市科技局-贵州医科大学联合基金(GY2015-23);国家科技支撑计划(2011BAC06B12)
【所属期刊栏目】 专题研究 (2018年09期)
  • 【DOI】10.19367/j.cnki.1000-2707.2018.09.002
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】57
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