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靶向OPN基因shRNA慢病毒载体的构建及其对人肺腺癌细胞A549侵袭能力的影响

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【作者】 罗猛裴登科孔德淼刘波金星

【Author】 LUO Meng;PEI Dengke;KONG Demiao;LIU Bo;JIN Xing;Department of Thoracic Surgery,Guizhou People’s Hospital Affiliated to Guizhou Medical University;

【通讯作者】 孔德淼;

【机构】 贵州省人民医院胸外科

【摘要】 目的:通过构建慢病毒介导的骨桥蛋白(OPN)基因沉默shRNA载体,并转染人肺腺癌细胞A549建立OPN基因稳定沉默的肺癌细胞株,为进一步研究OPN与非小细胞肺癌侵袭转移相关分子机制奠定细胞学基础。方法:设计靶向OPN基因的3条siRNA靶点系列,分别合成含有干扰系列的shRNA,与双酶切后的pLVXshRNA2-puro载体连接,构建pLVX-shRNA2-puro-OPN1、pLVX-shRNA2-puro-OPN2和pLVX-shRNA2-puro-OPN3病毒载体,并转化于DH5ɑ感受态细胞,挑阳性克隆质粒测序,通过转染293T细胞,获取慢病毒颗粒,转染人肺腺癌细胞A549,用含嘌呤霉素培养基筛选培养,应用定量PCR及Western Blot检测OPN基因沉默效果,选用沉默效果最佳的pLVX-shRNA2-puro-OPN1建立OPN基因稳定沉默细胞株,并用transwell方法检测各组肺癌细胞株的侵袭能力。结果:经测序鉴定成功构建pLVX-shRNA2-puro-OPN慢病毒载体,定量PCR及Western Blot检测发现转染pLVX-shRNA2-puro-OPN-1、pLVX-shRNA2-puro-OPN2慢病毒载体可明显降低A549细胞株中的OPN mRNA及蛋白水平; OPN基因稳定沉默明显抑制A549细胞株的侵袭能力。结论:成功构建pLVX-shRNA2-puroOPN慢病毒载体,OPN基因稳定沉默明显抑制A549细胞株的侵袭能力。

【基金】 贵州省科技厅项目[黔科合SY字(2013)3002号];贵州省科技厅项目[黔科合J字(2012)2234号]
【所属期刊栏目】 基础研究 (2018年09期)
  • 【DOI】10.19367/j.cnki.1000-2707.2018.09.005
  • 【分类号】R734.2
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】133
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