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阿魏酸对脂多糖诱导的OA软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

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【作者】 刘新宁曹滨滨刘杰毕建年赵亮

【Author】 LIU Xinning;CAO Binbin;LIU Jie;Department of Orthopedics,Weihai Stomatological Hospital;

【机构】 威海口腔医院骨外科

【摘要】 目的探讨阿魏酸(Ferulic acid,FA)对脂多糖(LPS)诱导的OA软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法于4月龄新西兰大白兔膝软骨提取软骨细胞,体外培养后分为4组,空白对照组、OA模型组、OA+FA低剂量组和OA+FA高剂量组,将2μg/ml的LPS加入培养基中培养软骨细胞,构建OA软骨细胞模型,对照组加入等体积的细胞培养液,选取合适的阿魏酸浓度,确定低剂量组和高剂量组,低剂量组和高剂量组则分别加入5μmol/ml、20μmol/ml的阿魏酸进行共培养,甲苯胺蓝染色观察正常软骨细胞形态,qRT-PCR法检测4组软骨细胞Ⅱ型胶原基因的表达(COL2)、软骨细胞基质金属蛋白(MMP-13)基因的表达,CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,Western blot检测Wnt2、GSK-3β、β-catenin、COL2、MMP-13、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞,软骨细胞在显微镜下呈现形态不规则、梭形透光度良好的多层细胞,细胞核红染,呈球形;qRT-PCR和Western blot结果显示OA模型组COL2基因和蛋白的表达量显著低于空白组(P<0.05)。低剂量组、高剂量组COL2的基因和蛋白的表达情况显著高于模型组(P<0.05),且高剂量组的表达水平更高(P<0.05);模型组的MMP-13基因和蛋白的表达显著高于空白组(P<0.05),低剂量组、高剂量组MMP-13基因和蛋白的表达显著低于模型组(P<0.05),且低剂量组的MMP-13蛋白的表达水平更高(P<0.05);CCK-8法检测软骨细胞的增殖细胞情况显示,模型组软骨细胞的增殖情况显著低于空白组(P<0.05),低剂量组、高剂量组软骨细胞的增殖情况显著高于模型组(P<0.05),且高剂量组的增殖水平更高(P<0.05);模型组的Bcl-2/Bax显著低于空白组(P<0.05),低剂量组、高剂量组Bcl-2/Bax显著高于模型组(P<0.05),且高剂量组的Bcl-2/Bax水平更高(P<0.05);与空白组相比,模型组Wnt2、GSK-3β、β-catenin水平明显升高,阿魏酸呈剂量依赖性抑制Wnt2、GSK-3β、β-catenin蛋白表达(P<0.05)。结论阿魏酸可以通过Wntβ-catenin通路影响脂多糖诱导的OA软骨细胞的增殖。

【关键词】 阿魏酸Wntβ-catenin脂多糖软骨细胞细胞增殖
【所属期刊栏目】 论著 (2020年11期)
  • 【分类号】R965
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