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测定化学物对乙酰胆碱酯酶抑制毒性的微板吸光法研究

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【作者】 陶珊珊葛会林袁宏球阳辛凤

【Author】 Tao Shanshan;Ge Huilin;Yuan Hongqiu;Yang Xinfeng;Hainan Key Laboratory of Tropical Fruit and Vegetable Products Quality and Safety, Analysis and Testing Center, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences;College of Plant Science & Technology, Huazhong Agricultural University;

【机构】 中国热带农业科学院分析测试中心海南省热带果蔬产品质量安全重点实验室华中农业大学植物科学技术学院

【摘要】 随着化学污染物种类与数量的日益增多,高通量测试方法显得越来越重要。基于乙酰胆碱酯酶(ACh E)抑制法原理,以多功能酶标仪为测试设备,96孔微板为暴露反应载体,建立了测定化学物对ACh E抑制毒性的微板吸光法。系统研究了ACh E浓度、碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)浓度、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)浓度对显色吸光度、吸光度变化速率、化学物测试毒性的影响。结果表明,随着ACh E、DTNB、ATCI的浓度增加,吸光度均增加;吸光度变化速率与ACh E浓度呈正相关,与DTNB浓度基本无关,与ATCI浓度呈现先增后减的双相关系;随着ATCI浓度增加,灭多威剂量-效应曲线(DRC)向右移动。最终建立的优化测试条件为DTNB 0.2 g·L-1、ATCI 0.2 g·L-1、ACh E 0.04 U·m L-1、p H 6.8、反应温度29℃及暴露时间15 min;并与国标方法进行了对比与验证,发现试剂加样顺序对毒性测定结果有显著影响。基于ACh E的微板毒性测试结果表明,灭多威的DRC呈现良好的S型曲线,可用Weibull函数有效表征,拟合决定系数R2大于0.97,空白变异控制在了±10%以内。此方法可用于化学污染物的高通量毒性检测。

【基金】 国家自然科学基金(21607171);海南省应用技术研发与示范推广专项(ZDXM2014047,ZDXM20130043);海南省自然科学基金(213027)
【所属期刊栏目】 专论 (2018年01期)
  • 【分类号】X830
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】96
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