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利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因

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【作者】 李文龙冯永永李凯彬聂湘平

【Author】 Li Wenlong;Feng Yongyong;Li Kaibin;Nie Xiangping;Department of Ecology/Hydrobiology Research Institute, College of Life Science and Technology, Jinan University;Pearl River Fisheries Research Institute,CAFS;

【机构】 暨南大学生命科学技术学院生态系/水生生物研究中心中国水产科学研究院珠江水产研究所

【摘要】 β-胡萝卜素-15,15’-加氧酶(β-carotene-15,15’-momoxygenase 1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1与bco1l是编码此酶的主要基因。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15’-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究。分别在斑马鱼bco1与bco1l基因2号外显子选取sg RNA识别位点,体外转录制备sg RNA并与Cas9 m RNA混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24 h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sg RNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体。本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料。

【基金】 国家科技支撑计划项目:鱼类实验动物新资源的开发与标准化研究(2015BAI09B05)
【所属期刊栏目】 专论 (2018年03期)
  • 【分类号】X171.5
  • 【下载频次】206
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