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双酚A诱导下双齿围沙蚕实时荧光定量PCR内参基因的筛选

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【作者】 薛圣伦黄艺孙嘉杨大佐周一兵赵欢

【Author】 Xue Shenglun;Huang Yi;Sun Jia;Yang Dazuo;Zhou Yibing;Zhao Huan;Key Laboratory of Marine Bio-resource Restoration and Habitat Reparation in Liaoning Province,Dalian Ocean University;Key Laboratory of Mariculture & Stock Enhancement in North China’s Sea,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Dalian Ocean University;

【通讯作者】 赵欢;

【机构】 大连海洋大学辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室

【摘要】 为了筛选出在双酚A诱导下双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)体壁组织中最适内参基因,以不同浓度双酚A诱导下双齿围沙蚕互补脱氧核糖核酸(cDNA)为模板进行实时荧光定量PCR,利用Ge Norm、Norm Finder和Bestkeeper三个软件对肌动蛋白(beta-actin, Actin)、核糖体蛋白5(ribosomal protein L5, RPL5)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)、微管蛋白(β-tubulin, Tub)、琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase complex flavoprotein subunit A, SDHA)和组蛋白(Histone Cluster 1 H2A Family Member A, HH2A)这6个备选内参基因的表达量进行分析,筛选出稳定表达的内参基因。结果表明6个内参基因的基因表达量由大到小为Actin>GAPDH>SDHA>HH2A>Tub>RPL5,Bestkeeper软件分析得到6种内参基因稳定性排名为Actin>RPL5>SDHA>Tub>HH2A>GAPDH,Ge Norm软件分析得出6种内参基因的稳定性排名为SDHA>RPL5>Actin>Tub>HH2A>GAPDH,Normfinder分析的结果为Actin>SDHA>RPL5>Tub>HH2A>GAPDH。综合以上结果确定双酚A诱导下双齿围沙蚕最优内参基因为Actin,不推荐GAPDH作为内参基因使用。推荐同时选取多对内参基因进行实验,可以进一步减少误差。

【关键词】 双酚A双齿围沙蚕内参基因Actin
【基金】 辽宁省大型仪器设备共享服务平台能力建设基金;农业农村部北方海水增养殖重点实验室开放课题(2018-KF-15)
【所属期刊栏目】 专论 (2019年01期)
  • 【分类号】X174
  • 【下载频次】52
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