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维吉尼亚链霉菌P450-105D1在大肠杆菌中自诱导表达和雄烯二酮的羟化活性

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【作者】 张雁韩毛振罗学才王晶晶周明辉陈亚军

【Author】 ZHANG Yan;HAN Mao-zhen;LUO Xue-cai;WANG Jing-jing;ZHOU Ming-hui;CHEN Ya-jun;School of Life Sciences, Hefei Normal University;College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology;Hefei Tingxiandu Biotechnology Co.,Ltd.;

【通讯作者】 陈亚军;

【机构】 合肥师范学院生命科学学院华中科技大学生命科学与技术学院合肥停弦渡科技有限公司

【摘要】 雄烯二酮是甾体药物生产的重要中间体,其C9位羟基化产物9-羟基雄烯二酮也是多种重要甾体药物的合成前体,具有重要的临床药用价值。微生物转化生产9-羟基雄烯二酮具有重要的经济价值。将维吉尼亚链霉菌IBL14中svu005与pET28a质粒融合,导入大肠杆菌BL21(DE3)。使用优化的自诱导培养基诱导表达其产物细胞色素P450-105D1(CYP105D1)蛋白,以雄烯二酮等多种甾体作为底物进行微生物羟化。结果显示,构建的重组质粒pET28a-svu005在大肠杆菌中成功表达,使用ZYM培养基,自诱导表达的活性蛋白产量(0.0916 nmol/L)显著高于传统的IPTG诱导方式的产量(0.0367 nmol/L)。表达产物CYP105D1可以羟化雄烯二酮,经HPLC检测,产物为9-羟基雄烯二酮。发现了微生物转化合成9-羟基雄烯二酮的新途径,具有很好的工业应用前景。

【基金】 安徽省高校自然科学基金重点项目(KJ2018A0494);安徽省青年人才支持项目(gxyq2018056);国家自然科学青年基金(31800049)
【所属期刊栏目】 研究报告 (2019年05期)
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】15
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