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应用ELISA测定重组细胞因子中残余大肠杆菌菌体蛋白含量

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【作者】 饶春明王军志高凯郭莹

【机构】 中国药品生物制品检定所!北京 100050

【摘要】 目的建立灵敏度高,重复性好的残余宿主菌E。coli菌体蛋白含量的测定方法。方法电泳显示 5株大肠杆菌DH52、JM103、JM105、N8430和HB101的蛋白质组分各不相同,但均可被免疫印迹显色,说明免抗 E.coli.K12,C600抗体包括了其主要菌体蛋白的抗体,因此,用ELISA检测相应的菌体蛋白含量。结果优化后的 ELISA对 DKa、JM103、JM105和 HB101检测灵敏度均达到 10 ng/ml。用混合菌体蛋白作为 E.coli菌体蛋白通用标准, 其灵敏度达到7.8ng/ml,含量在7.8-250ng/ml范围内,一次方程(y=a+bx)线性良好(r>0.990);在7.8-1000ng/ml 范围内,二次方程(y=a+bx+cx2)线性良好(r>0.990)。变异系数小于14%(n=4)。应用该法对国内外重组产品 进行测定,发现不同厂家不同产品其菌体蛋白含量各不相同。 8种细胞因子共 57批,菌体蛋白含量大于 1%的 3 批,占5.3%;大于0.1%的9批,占15.8%;大于0.01%的28批占49.1%。说明还有不少厂家其重组产品纯化工艺 有待进一步提高。结论本方法灵敏度高,重复性好,可用于重组产品?

【关键词】 菌体蛋白ELISA重组细胞因子
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2000.01.42.raochm.019
  • 【分类号】R378
  • 【被引频次】14
  • 【下载频次】333
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