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应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

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【作者】 牟颖高姝娟张岩苏丹苏大明任晓君由德林罗元明闫岗林罗贵民黄华梁刘子

【Author】 MU Ying ,GAO Shujuan, ZHANG Yan et al (Key Laboratory of Molecular Enzymology and Engineering, Jilin University, Changchun 130023)

【机构】 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室吉林大学分子酶学工程教育部重点实?

【摘要】 目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬(GPX)活性的含硒单链抗体酶。方法 利用RT-PCR方 法从杂交瘤细胞株2F3中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经DNA序列测定后,构建成表达载体 pTMF-scFv,经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变,得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒pTMF-scFv分别转 化入大肠杆菌JM109(DE3)、BL21(DE3)和 BL21(coden plus),表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的5%-10%、15%- 20%和 25%-30%。该重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为30000。其 GPX活性为3400U/μmol,接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。

【基金】 863高技术(103-13-01-05);国家自然科学资助(20072010)。
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2001.02.87.mouy.008
  • 【分类号】R341
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】199
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