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新城疫病毒TL1株L基因的克隆及其真核表达载体的构建

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【作者】 王学理王兴龙李晓艳任林柱刘锴

【Author】 WANG Xue-li,WANG Xing-long,LI Xiao-yan,et al(College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China)

【机构】 吉林大学畜牧兽医学院解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林大学畜牧兽医学院 (长春130062)解放军军事医学科学院军事兽医研究所(长春130062)内蒙古民族大学动物科技学院(通辽028042)(长春130062)(长春130062)解放军军事医学科学院军事兽医研究所(长春130062)内蒙古民族大学动物科技学院(通辽028042)

【摘要】 目的对新城疫病毒TL1株L基因进行克隆、序列分析及真核表达载体构建。方法根据GenBank登录的新城疫病毒L基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR对内蒙古分离株TL1的L基因进行整体扩增。将扩增产物提纯后,克隆入pGEM-Teasy载体,再亚克隆至真核表达载体pCI-neo上,通过酶切、PCR鉴定及测序进行验证。结果测序拼接得出L基因的全序列长度为6704bp,该基因的ORF总长为6615bp,编码2204个氨基酸。与GenBank登陆的12株参考毒株比较L基因编码区全核苷酸序列和氨基酸序列,发现TL1株与鹅源新城疫NA-1株、ZJ1株和SF02株的同源性极高,说明四者亲缘关系较近。结论已成功构建L基因真核表达载体,为对该株病毒进行反向遗传操作以及有关功能基因组研究奠定了基础。

【关键词】 新城疫病毒L基因克隆真核表达
【基金】 军事医学科学院科技创新基金资助项目;吉林省科技厅科技发展计划项目(20050549)资助.
【所属期刊栏目】 基础研究 (2007年08期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2007.08.15.wangxl.002
  • 【分类号】S852.65
  • 【下载频次】125
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