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天花粉蛋白的定点突变及聚乙二醇修饰

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【作者】 安群星雷迎峰穆士杰张献清陈蕤夏爱军陈晨易静吴原茹徐志凯

【Author】 AN Qun-xing,LEI Ying-feng,MU Shi-jie,et al (Department of Blood Transfusion,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University ,Xi’an 710032,China)

【机构】 第四军医大学西京医院输血科第四军医大学微生物学教研室第四军医大学微生物学教研室 西安710032西安710033西安710032

【摘要】 目的对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变及聚乙二醇(PEG)修饰,并对修饰产物进行DNA酶活性分析。方法选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,将所构建的两个突变体(TCSYFF81-83ACS和TCSKR173-174CG)在大肠杆菌中表达,并纯化表达产物。通过第82位和173位引入的半胱氨酸残基,分别对突变体蛋白进行PEG定点修饰。通过与突变型TCS比较,分析两个PEG修饰型TCS的DNA酶活性。结果突变的TCS经酶切鉴定及测序分析,证明质粒构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为30000,经PEG修饰后,相对分子质量约为40000。初步分析显示,与突变型TCS相比,所构建的两个PEG修饰型TCS也显示出类似DNA酶活性。结论成功进行了TCS的定点突变及PEG修饰,为基因工程及化学修饰方法改造TCS提供了一条可行的途径。

【关键词】 天花粉蛋白定点突变聚乙二醇修饰
【基金】 陕西省科技计划项目(2003K10G9);西京医院学科助推计划项目(XJZT07M09)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2008年03期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2008.03.31.anqx.007
  • 【分类号】Q789
  • 【下载频次】167
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