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多拷贝重组HBsAg质粒的构建及在毕赤酵母中的高效表达

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【作者】 何成蔡蓓蓓楼觉人

【Author】 HE Cheng,CAI Bei-bei,LOU Jue-ren (Shanghai Institute of Biological Products,Shanghai 200052,China)

【机构】 上海生物制品研究所第二研究室上海生物制品研究所第二研究室 上海200052上海200052

【摘要】 目的通过构建多拷贝数表达质粒,获得高表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株。方法通过对单拷贝表达质粒进行改造,将表达盒(5′AOX-HBsAg-TT)重复导入载体,构建多拷贝数表达质粒。通过电转化、15L规模发酵和纯化,获得纯化HBsAg颗粒,并对表达产物的特异性、免疫原性及表达量与拷贝数间的关系进行分析。结果多拷贝数重组毕赤酵母的表达产物经ELISA、SDS-PAGE、Western blot检测,显示出良好的特异性,电镜观察证明表达产物能够自发装配成22nm类病毒颗粒(VLP),其表达量与拷贝数呈正相关,拷贝数提高未对菌体正常生长带来影响,HBsAg制备的免疫原能有效刺激小鼠产生保护性抗体。结论含多拷贝数表达质粒的工程菌可显著提高毕赤酵母HBsAg表达量。

【所属期刊栏目】 预防制品 (2008年03期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2008.03.44.hech.003
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】19
  • 【下载频次】404
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