节点文献

重组人抗乙型肝炎病毒表面抗体的筛选及序列分析

免费订阅

【作者】 宿晓云王毅王芳石毅周余来王秀娟颜炜群

【Author】 SU Xiao-yun, WANG Yi, WANG Fang, et al (School of Pharmaceutical Sciences, Jilin University, Changchun 130021, China)

【机构】 吉林大学药学院吉林省肝胆病医院五疗区

【摘要】 目的克隆、筛选人抗乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs),并对其基因序列进行分析。方法从抗-HBs抗体阳性血液中分离淋巴细胞,提取总RNA,合成cDNA,以此为模板,PCR扩增轻链和重链抗体可变区基因;应用已构建的抗体支架载体,构建重组表达载体,转化毕赤酵母X33,建立相应的酵母表达文库;甲醇诱导表达,Westernblot及ELISA筛选抗-HBs抗体阳性菌株;PCR扩增DNA片段,进行测序及Blastn比对,并与已发表的抗-HBs抗体序列进行同源性分析。结果重链及轻链抗体重组表达载体经双酶切鉴定,证明构建正确;经Westernblot及ELISA筛选,获得了具有HBsAg结合活性的完整轻重链抗体;轻链可变区与已发表序列核苷酸同源性为93%,而氨基酸同源性仅为88%,尤其CDR3变异较大;重链可变区与已发表序列同源性较低,CDR3区基因长度及序列均有较大差别。结论应用毕赤酵母表达体系筛选,获得了新的抗-HBs抗体。

【基金】 吉林省再生医学重点实验室资助项目(200507)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2008年09期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2008.09.18.suxy.011
  • 【分类号】R392
  • 【下载频次】74
节点文献中: 

本文链接的文献网络图示:

浏览历史:
下载历史: