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重叠PCR技术在构建sodAP基因表达载体中的应用

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【作者】 叶艳华何冰芳

【Author】 YE Yan-hua, HE Bing-fang (Center for Disease Control and Prevention of Nanjing City, Nanjing 210003, China)

【机构】 南京市疾病预防控制中心南京工业大学制药与生命科学学院

【摘要】 目的应用重叠PCR技术,构建节杆菌DMDC12的Mn-SOD基因sodAP的重组表达质粒,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法设计两对引物,分别扩增启动子P121和sodAP基因序列,利用重叠PCR技术,将启动子P121与sodAP基因相连接并测序,连接产物插入原核表达质粒pET-22b(+),构建重组质粒pET-PsodAP,转化E.coliBL21(DE3)进行表达。用SDS-PAGE检测表达产物,光密度定量分析法分析目的蛋白表达量。结果启动子P121和sodAP基因的连接产物经凝胶电泳检测,可见约800bp的目的条带,测序结果与预期相符;重组表达质粒pET-PsodAP经双酶切鉴定,表明构建正确;目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中获得了表达,表达量占菌体总蛋白的19%。结论应用重叠PCR技术,成功构建了sodAP基因的重组表达质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得表达,为Mn-SOD的进一步工业化生产奠定了基础。

【关键词】 重叠PCR节杆菌DMDC12sodAP基因表达载体
【所属期刊栏目】 基础研究 (2008年09期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2008.09.31.yeyh.005
  • 【分类号】Q782
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】361
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