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多拷贝脑钠肽基因表达质粒的构建及其表达

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【作者】 易俊波买制刚卢海蓉黄德新李凌云林枫

【Author】 YI Jun-bo,MAI Zhi-gang,LU Hai-rong,et al(Biotechnology Research Center,Shenzhen University,Shenzhen 518057,Guangdong Province,China)

【机构】 深圳大学生化工程技术研究中心

【摘要】 目的构建多拷贝脑钠肽(BNP)基因重组表达质粒,并探讨BNP基因的拷贝数与其表达水平的相关性。方法通过人工合成和PCR技术扩增BNP基因,将其克隆至载体pCW111中,构建表达质粒pBNP11,并通过亚克隆构建含有不同数量表达盒的正向串联表达质粒,分别转化大肠杆菌DH5α和BL21(DE3),经温度诱导表达,SDS-PAGE分析,并经激光扫描测定目的蛋白的表达量。结果测序及酶切鉴定证明1~3拷贝BNP重组表达质粒构建正确,重组蛋白在大肠杆菌DH5α和BL21(DE3)中均可获得表达,表达量分别为菌体总蛋白的8.12%、9.94%、和9.18%。结论已构建了多拷贝BNP的重组表达质粒,BNP的表达水平随BNP拷贝数的增加而升高,但并未成倍增加。

【关键词】 脑钠肽质粒拷贝数表达盒原核表达
【基金】 深圳大学科研启动基金资助项目(200711)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2008年12期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2008.12.35.yijb.004
  • 【分类号】Q784
  • 【被引频次】5
  • 【下载频次】133
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