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肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

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【作者】 杨英俊陈辉

【Author】 YANG Ying-jun,CHEN Hui(Clinical Laboratory,The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China)

【机构】 重庆医科大学附属第一医院检验科

【摘要】 目的建立实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因水平。方法提取人全血基因组DNA,常规PCR扩增hTERT基因,与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α,提取重组质粒pMD18-T-hTERT作为定量检测的标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行方法的验证。采用建立的实时荧光定量PCR法检测肝癌患者和健康人血浆中hTERT DNA的水平。结果重组质粒pMD18-T-hTERT经PCR及测序鉴定证明构建正确。以该重组质粒为标准品绘制的标准曲线在103~108copies/μl浓度范围内线性关系良好,相关系数R2为0.997;批内及试验间变异系数分别为0.86%和1.44%;特异性良好。肝癌患者血浆hTERT DNA水平显著高于健康人(P<0.05)。结论已成功建立了肝癌患者血浆hTERT DNA的实时荧光定量PCR检测方法,为临床通过检测血浆hTERT DNA辅助诊断肝癌提供了良好的工具。

【基金】 重庆市卫生局科研项目(04-2-155,05-2-125)
【所属期刊栏目】 实验技术 (2010年12期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2010.12.107.yangyj.025
  • 【分类号】R735.7
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】168
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