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随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白的纯化及鉴定

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【作者】 王健孙成金李莉莉陈祥鹏李军王恒张振龙

【Author】 WANG Jian,SUN Cheng-jin,LI Li-li,CHEN Xiang-peng,LI Jun,WANG Heng,ZHANG Zhen-long(National Vaccine & Serum Institute,Beijing 100024,China)

【机构】 北京生物制品研究所第四研究室北京协和医学院基础学院病原生物学系

【摘要】 目的纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白,并进行各项鉴定。方法对BL21(DE3)-M.RCAg-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的M.RCAg-1蛋白进行各种理化性质鉴定;采用Western blot法检测其反应原性;以不同剂量的M.RCAg-1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价;间接荧光免疫法(IFA)分析免疫血清对天然疟原虫抗原的识别;酶联免疫斑点试验检测特异性鼠T淋巴细胞的活化及细胞因子的分泌;体外生长抑制试验检测免疫兔血清对恶性疟原虫生长的影响。结果 M.RCAg-1蛋白表达量约为菌体总蛋白的30%,浓度为1.5 mg/ml,纯度可达95%左右,等电点为5.0;内毒素残留量均小于2.5 EU/mg,宿主蛋白残留量为0.08%,N-末端氨基酸序列正确;可与相应鼠单抗特异性结合;免疫小鼠血清抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,20及30μg剂量组在末次免疫后,血清抗体滴度均可达1∶1 031 707;各免疫组小鼠血清均能识别恶性疟原虫天然抗原,且呈抗原剂量依赖性;10、20和30μg剂量组能刺激相应特异性脾淋巴细胞显著增殖(P<0.01)及分泌IFNγ和IL-4(P<0.01),并能较好地抑制疟原虫体外生长。结论纯化的M.RCAg-1蛋白理化性质稳定,具有较强的免疫原性,能激发可持续、高滴度的特异性抗体,并能诱发显著的T细胞应答,是极具潜力的候选疫苗蛋白,具有较好的开发前景。

【关键词】 M.RCAg-1蛋白多表位蛋白疟疾疫苗
【基金】 863计划“疫苗与抗体工程”重大专项(2006AA02A224);“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项(2008ZX10004-015)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2011年12期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2011.12.16.wangj.020
  • 【分类号】R392.1
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】68
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