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H1N1亚型流感病毒M1基因重组杆状病毒的构建及鉴定

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【作者】 郭建强付金奇姚立红陈爱珺徐鹏卫殷继永张智清

【Author】 GUO Jian-qiang,FU Jin-qi,YAO Li-hong,CHEN Ai-jun,XU Peng-wei,YIN Ji-yong,ZHANG Zhi-qing(Institute for Viral Disease Control and Prevention,China CDC,Beijing 100052,China)

【机构】 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

【摘要】 目的构建H1N1亚型流感病毒M1基因重组杆状病毒,并进行鉴定。方法 PCR扩增H1N1亚型流感病毒(A/PR/8/34)全长M1基因,与pFastBacdua(lpFBD)载体连接,构建重组杆状病毒转移载体pFBD-M1,转化含有Bacimd和Helper质粒的DH10Bac感受态细胞,获得骨架质粒rBacmid-M1,将其转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-M1。采用噬斑形成法检测病毒滴度,PCR法检测M1基因的插入,间接免疫荧光、Western blot和ELISA法检测M1蛋白的表达。结果重组杆状病毒骨架质粒rBacmid-M1经PCR鉴定证实构建正确;第3代rBac-M1病毒滴度为3×108pfu/ml;感染rBac-M1的sf9细胞经PCR扩增可见3 300 bp的条带,间接免疫荧光检测可见特异性绿色荧光,Western blot检测可与鼠抗流感病毒(PR8)和鼠抗M1蛋白(PR8)多克隆抗体发生特异性反应,ELISA检测M1蛋白可与鼠抗流感病毒(PR8)多克隆抗体发生特异性反应,具有良好的反应原性。结论已成功构建了H1N1亚型流感病毒M1基因重组杆状病毒,为进一步研究流感病毒M1的功能及新型流感疫苗开发奠定了基础。

【所属期刊栏目】 疫苗研究 (2012年08期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2012.08.16.guojq.001
  • 【分类号】R373.13
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】81
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