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重组人成纤维细胞生长因子21慢病毒质粒的构建及鉴定

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【作者】 陈瑜徐丽兰杨建波马开利和占龙马进李鸿钧吴正存鲁帅尧

【Author】 CHEN Yu;XU Li-lan;YANG Jian-bo;MA Kai-li;HE Zhan-long;MA Jin;LI Hong-jun;WU Zheng-cun;LU Shuai-yao;Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research and Development on Severe Infectious Diseases;

【机构】 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

【摘要】 目的构建人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重组慢病毒质粒,并进行包装和鉴定。方法 PCR扩增人FGF21 ORF序列,经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,连接至慢病毒载体PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,构建重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21,经293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,并感染KMB17靶细胞。荧光显微镜观察293T细胞中报告基因EGFP的绿色荧光,判断重组慢病毒的感染效率;RT-PCR法检测KMB17靶细胞中h FGF21基因m RNA的转录;免疫荧光和Western blot法检测KMB17靶细胞中h FGF21蛋白的表达。结果重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21经双酶切及测序鉴定,证明构建正确,在包装细胞中获得较高的转染效率,重组慢病毒感染KMB17靶细胞72 h后,荧光显微镜下可见EGFP绿色荧光。感染组KMB17靶细胞中存在h FGF21基因m RNA的转录和蛋白的表达。结论成功构建了重组慢病毒质粒PLV-EF1aEGFP[2A]Puro-h FGF21,并于KMB17靶细胞中表达,为FGF21功能与特性的相关研究及基因工程药物的探索和研发奠定了基础。

【基金】 协和青年基金资助和中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(33320140083);云南省应用基础研究计划面上项目(2013FB089)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2015年07期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.000951
  • 【分类号】R373
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】186
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