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肺炎链球菌神经氨酸酶nanA蛋白的原核表达、纯化及其免疫保护效果

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【作者】 黎美君曹炬闵讯蔡莺莺尹一兵张雪梅王虹

【Author】 LI Mei-jun;CAO Ju;MIN Xun;CAI Ying-ying;YIN Yi-bing;ZHANG Xue-mei;WANG Hong;Department of Laboratory Medicine, Key Laboratory of Ministry of Education for Clinical Laboratory Diagnosis,Chongqing Medical University;

【机构】 重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室

【摘要】 目的原核表达并纯化肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)神经氨酸酶nan A蛋白,并在小鼠模型中检测其保护效果,评价其作为S.pn疫苗候选蛋白的可行性。方法构建重组原核表达质粒p ET28a(+)-nan A,重组nan A蛋白经IPTG诱导及Ni-NTA亲和层析柱纯化后,采用黏膜(与CT佐剂混合)和腹腔(与Alum佐剂混合)给药途径免疫BALB/c小鼠,建立相应的S.pn感染模型,同时设相应对照组(佐剂+PBS),ELISA法检测特异性抗体及亚型;小鼠鼻腔滴定试验检测主动免疫保护效果;体内抗定植试验检测nan A蛋白对19F型S.pn在鼻咽部定植的保护作用。结果重组表达质粒p ET28a(+)-nan A经双酶切(NdeⅠ/XhoⅠ)及测序鉴定证明构建正确;重组蛋白的相对分子质量为55 000,主要以可溶性形式表达,约占菌体总蛋白的55%,纯化后纯度达90%;黏膜免疫组小鼠唾液中Ig A及Ig G效价分别为1.6×103和3.2×102,血清中Ig G效价为2.0×106,亚型主要为Ig G2a;腹腔免疫组血清中Ig G效价为0.5×106,亚型主要为Ig G1;黏膜和腹腔免疫小鼠生存时间较相应对照组显著延长(P<0.05),黏膜免疫组小鼠生存率较其对照组显著增加;黏膜免疫可显著降低S.pn 19F在宿主鼻咽部和肺部的定植。结论原核表达并纯化了nan A蛋白,诱导的小鼠免疫反应可有效抵抗S.pn的感染,并可显著降低S.pn在宿主鼻咽部及肺部的定植,表明nan A蛋白是较理想的S.pn疫苗候选蛋白。

【关键词】 肺炎链球菌nanA蛋白基因表达纯化保护效果
【基金】 国家自然科学基金(31070819)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2015年07期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.000953
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】136
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