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狂犬病病毒磷蛋白重组人5型腺病毒的构建及鉴定

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【作者】 靳红亮王述超高菽蔓张守峰严妍王东方刘晔扈荣良

【Author】 JIN Hong-liang;WANG Shu-chao;GAO Shu-man;ZHANG Shou-feng;YAN Yan;WANG Dong-fang;LIU Ye;HU Rong-liang;College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University;

【机构】 吉林农业大学动物科学技术学院军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

【摘要】 目的构建表达狂犬病病毒(rabies virus,RABV)BD06株磷蛋白(phosphoprotein,P)的重组人5型腺病毒,并进行鉴定。方法质粒p MD18-T-BD06P经双酶切后,获得完整的P蛋白基因,将其克隆至腺病毒表达系统穿梭质粒pac Ad5CMVK-Np A,构建重组穿梭质粒pac Ad5CMV-BD06P,与骨架质粒pac Ad5 9.2-100经PacⅠ酶切线性化后,共转染HEK293AD细胞,经同源重组,获得表达RABV P蛋白的重组人5型腺病毒r Ad5-BP。采用K覿ber法计算r Ad5-BP滴度,RT-PCR、Western blot、直接免疫荧光方法(direct immunofluorescence assay,d FA)检测P蛋白基因在HEK-293AD细胞的转录及表达水平。以107 TCID50r Ad5-BP肌肉注射免疫昆明小鼠,14 d后,经尾静脉采血,分离血清,IFA法检测抗RABVP蛋白抗体及其反应活性。结果经酶切及测序鉴定证明重组穿梭质粒pac Ad5CMV-P构建正确;重组腺病毒r Ad5-BP滴度可达108 TCID50/ml,能够介导P蛋白在HEK293AD细胞中的转录及表达,接种小鼠后可刺激机体产生针对RABVP蛋白抗体,且与RABV具有良好的反应活性。结论成功构建了RABVBD06株P蛋白重组人5型腺病毒,该病毒能够介导P蛋白在小鼠体内有效表达,刺激机体产生针对RABVP蛋白抗体,且与RABV具有良好的反应活性,为进一步研究RABV P蛋白在病毒感染过程中的作用奠定了基础。

【关键词】 狂犬病病毒磷蛋白人5型腺病毒
【基金】 国家高技术研究发展(863)计划(2011AA10A212)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2015年10期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.001082
  • 【分类号】R373
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】70
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