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犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

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【作者】 刘原源黄书晨高珺珊王晓岑宫鹏涛张壮志李建华杨举李赫张西臣

【Author】 LIU Yuan-yuan;HUANG Shu-chen;GAO Jun-shan;WANG Xiao-cen;GONG Peng-tao;ZHANG Zhuang-zhi;LI Jian-hua;YANG Ju;LI He;ZHANG Xi-chen;College of Veterinary Medicine, Jilin University;

【机构】 吉林大学动物医学学院新疆畜牧科学院兽医研究所

【摘要】 目的建立简便、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原,免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体;利用HRP标记兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体,通过溶解、超声方法处理犬粪便样品;以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获抗体,HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体为检测抗体,通过棋盘法确定抗体最佳包被浓度、最佳封闭剂、待检粪样最佳稀释比例及酶标抗体最佳浓度。应用建立的双抗体夹心ELISA法对来自长春地区的64份犬粪便样品及来自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测。结果兔抗EdiagA864多克隆抗体的效价为105。建立的双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:抗体包被浓度为1∶50,封闭剂为1%BSA,粪液稀释度为1∶5,酶标二抗稀释度为1∶800。建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应;检测不同稀释度的粪便液,当稀释至1∶20时,P/N仍大于2;检测6份阳性样品与4份阴性样品的批间和批内变异系数均小于8。用建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性,64份待检样品的结果均为阴性。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性较强,敏感性较高,重复性较好,为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便、快速、特异的免疫学检测方法。

【基金】 国家公益性行业(农业)科研专项(201303042)
【所属期刊栏目】 技术方法 (2017年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.001619
  • 【分类号】R383.33
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】252
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