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小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达、纯化及其抗体间接ELISA检测方法的建立

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【作者】 王东方刘晔米立娟张守峰扈荣良

【Author】 WANG Dong-fang;LIU Ye;MI Li-juan;ZHANG Shou-feng;HU Rong-liang;College of Animal Science and Technology, Jin Agricultural University;

【机构】 吉林农业大学动物科学技术学院军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

【摘要】 目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits of ruminants virus,PPRV)N蛋白,纯化后建立其抗体间接ELISA检测方法。方法人工合成PPRV N蛋白基因序列,并构建重组质粒pSumo-mut-N,转化至大肠埃希菌Arctic Express中,IPTG诱导表达,并对IPTG浓度和诱导时间进行优化。表达的融合蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,以其作为包被抗原建立PPRV抗体间接ELISA检测方法,对临床样本进行检测。结果重组表达质粒pSumo-mut-N经双酶切和测序证明构建正确。N蛋白最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG于11℃诱导10 h。表达的重组蛋白相对分子质量约71 900,纯化后纯度在80%以上,浓度可达120μg/ml,与PPRV阳性抗体具有良好的反应原性。基于N蛋白建立的PPRV抗体间接ELISA方法样品检测结果与已知血清之间的符合率为100%。结论原核表达并纯化了PPRV N蛋白,建立的基于N蛋白的PPRV抗体ELISA检测方法为PPRV抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用奠定了基础,对于流行病学免疫监测及控制PPRV的流行具有重要意义。

【基金】 农业公益性行业项目:新型动物疾病诊断技术应用研究(201203056)
【所属期刊栏目】 诊断制剂 (2017年08期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.001846
  • 【分类号】S852.65
  • 【被引频次】6
  • 【下载频次】197
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