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鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒的构建及鉴定

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【作者】 侯朋飞金宏丽李岭曹增国吴芳芳闫飞虎李国华赵永坤高玉伟王化磊杨松涛夏咸柱

【Author】 HOU Peng-fei;JIN Hong-li;LI Ling;CAO Zeng-guo;WU Fang-fang;YAN Fei-hu;LI Guo-hua;ZHAO Yong-kun;GAO Yu-wei;WANG Hua-lei;YANG Song-tao;XIA Xian-zhu;College of Veterinary Medicine, Jilin University;

【机构】 吉林大学动物医学学院军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室石河子大学

【摘要】 目的构建鼠源Bif-1(Bax-interacting factor-1)蛋白7种选择性剪接异构体(alternatively spliced isoforms)真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中表达。方法以提取的N2a细胞总RNA为模板,采用RT-PCR、重叠延伸PCR等方法扩增目的基因Bif-1(transcript variant 1、transcript variant 2、transcript variant 3、transcript variant x1、transcript variant x2、transcript variant x3、e),并将目的基因连入真核表达载体p IRES2-EGFP,构建重组质粒。重组质粒经鉴定正确后经脂质体介导转染BHK和N2a细胞,采用荧光显微镜观察及Western blot法检测转染细胞中Bif-1蛋白的表达。结果琼脂糖凝胶电泳可见与预期大小相符的核酸条带;重组质粒经PCR、双酶切、测序鉴定证明构建正确;重组质粒转染BHK或N2a细胞后荧光显微镜下可见绿色荧光;Westen blot可检出相应大小的目的条带。结论成功构建了鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中获得表达。为进一步探索Bif-1蛋白不同选择性剪接异构体的生物学功能,研究其在细胞自噬、细胞凋亡以及抗肿瘤等方面的作用奠定了基础。

【基金】 国家自然科学基金面上项目(31472175);吉林省科技发展计划-青年科研基金项目(20140520174JH);中国博士后科学基金特别资助(2014T71003)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2017年09期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.001860
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】76
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